I. Introducción:

La microscopía invertida se está convirtiendo en una técnica cada vez más popular, no sólo en su ámbito de aplicación tradicional, el cultivo de tejidos, sino también en otros campos nuevos y más amplios, como por ejemplo la investigación en ciencias de la vida, investigación medioambiental, biología celular y molecular, cultivo de tejidos, fisiología celular, biotecnología, farmacología, etc.

El origen de este aumento de popularidad de los microscopios invertidos se encuentra en la disponibilidad de nuevas :

Distancia de trabajo en el rango micrométrico.

Las nuevas técnicas recientemente inventadas precisan herramientas, accesorios e instrumentos nuevos, así como nuevos productos de un solo uso (desechables). Junto a ellos, también son necesarias las placas WillCo-dish^TM. WillCo-dish^TM es uno de esos productos que se necesitan en determinadas aplicaciones de microscopios invertidos, dado que el fondo de vidrio es imprescindible para trabajar con: grandes aumentos, fluorescencia de alta sensibilidad, microscopía confocal y análisis de imagen de alta resolución.

En el ámbito de la micromanipulación, utilizando las nuevas técnicas en microscopía invertida (p.ej. : en ICSI y en neurología), el soporte y las micropipetas constituyen un claro ejemplo de productos necesarios de un solo uso. La excelente calidad de los nuevos microscopios y de las ópticas de los objetivos permiten obtener una microscopía satisfactoria y de alto nivel, con una distancia de trabajo tan pequeña como la que corresponde al rango micrométrico.

Con una amplia gama de productos WillCo-dish^TM* , WillCo Wells B.V. fabrica e introduce varios tipos de productos para el mercado de la microscopía invertida, con un único propósito : posicionar un modelo de placas con fondo de vidrio para uso a nivel mundial en esta disciplina de la microscopía.

II. Beneficios del uso de las placas WillCo-dish^TM :

II-Ad 1. : Brillo de la imagen :

a. : Distancia de trabajo :

Tradicionalmente, el uso de la microscopía invertida se veía limitado por el grosor del fondo de las cámaras de plástico, cubetas y placas, en que se guardaban los especímenes.

El fondo "fino" de plástico exige una distancia de trabajo mayor y, por tanto, menor resolución (mínimo 2,0 mm aproximadamente) de los objetivos utilizados, lo que representa más de 11 veces ( !) el grosor del fondo de vidrio de la placa WillCo-dish ^TM .

Los objetivos de larga distancia de trabajo están disponibles hasta aumentos de 63x.

b. : Apertura numérica :

Además de reducirse la distancia de trabajo por el fondo de plástico grueso, los objetivos de larga distancia de trabajo presentan otro inconveniente : una baja apertura numérica (A.N.).

La A.N. del objetivo determina directamente el poder de resolución de la lente.

nota : En otras palabras, cuanto mayor es la A.N., mayor es la resolución del objetivo.

Aumentar la A.N. : Es posible reduciendo la distancia de trabajo y utilizando un medio de inmersión como el agua, glicerina o aceite.

nota : Como consecuencia directa del aumento de A.N., la distancia de trabajo se reduce al rango micrométrico.

El valor máximo de A.N. que se puede obtener es 1,40.

Válido para: Plan Apocromático 63x y Plan Apocromático 100x, utilizando aceite de inmersión.

La distancia de trabajo de estos objetivos puede variar desde 60 hasta 210 micras según el fabricante. Dichos objetivos de elevada A.N. están corregidos para observar el especímen a través del cubreobjetos, con un grosor de 0,17 mm.

c : Resolución :

La A.N. del objetivo determina directamente el poder de resolución de dicha lente.

El poder de resolución es : D R = K x l /A.N. , donde K = constante de Reyleigh = 0,61, l la longitud de onda de la luz empleada, y D R la menor distancia entre dos puntos del objeto que pueden diferenciarse en la imagen.

II-Ad 2. : Grandes aumentos :

Los principales fabricantes de microscopios ofrecen para imágenes de alta resolución objetivos de A.N. elevada (1,40) y corta distancia de trabajo.

Debido a la corta distancia de trabajo, es necesario un fondo de vidrio fino para obtener resultados eficaces.

II-Ad 3. : Microscopía (láser) confocal :

Las placas con fondo de vidrio WillCo-dish^TM se emplean generalmente con microscopios (de fluorescencia) confocales, en laboratorios de Ciencias de la Vida, en centros de investigación médica, en universidades y en hospitales, tanto en el ámbito público como en el privado.

Investigación en morfología celular : en el consumo de calcio por parte de las neuronas durante los impulsos nerviosos o en el crecimiento de las raíces de las plantas, el fondo de vidrio fino de nuestras placas permite realizar estos tipos de trabajos que requieren una microscopía con resolución extremadamente elevada.

WillCo-dish^TM , un modelo de perfección en sí mismo, es capaz de llevarlos a cabo eficazmente.

II-Ad 4. : Libre de tensiones :

a : Contraste Interferencial (ICT).

Una gran ventaja de WillCo-dish^TM es que se puede utilizar para aplicaciones ICT (o Nomarski).

Las aplicaciones ICT con WillCo-dish muestran una imagen brillante, a diferencia de las placas con fondo de plástico, debido al carácter birrefringente del mismo.

Dado que con el método ICT se utiliza un polarizador y un analizador cruzados, el carácter birrefringente del plástico interfiere con los polos cruzados, lo que provoca que la imagen obtenida muestre un ICT muy bajo.

b. : Contraste Hoffman (HMC) : sólo para placas de plástico.

La técnica del contraste Hoffman se utiliza en aplicaciones con cámaras o placas de plástico. Dicha técnica utiliza exclusivamente un polarizador (mientras que ICT emplea un polarizador y un analizador).

Por consiguiente, al no haber analizador, no se produce el efecto birefringente del plástico.

La ventaja del HMC (igual que con ICT) es que genera una imagen tridimensional, mientras que los inconvenientes del HMC son:

1. Muestra el contraste solamente en la superfície exterior de los objetos.

No existen objetivos de grandes aumentos con A.N. elevada disponibles para HMC (existen objetivos de grandes aumentos pero con baja A.N.).

Importante : Es muy posible que los usuarios de FIV que hayan adquirido óptica HMC y estén acostumbrados a utilizar placas de plástico sean reacios a cambiar a vidrio ahora.

II-Ad 5. : Fluorescencia :

Otra aplicación que está cobrando interés en el ámbito de la microscopía actual es la fluorescencia (p.ej. FISH, confocal).

En la microscopía de fluorescencia, la distancia de trabajo y la A.N. determinan la intensidad de la imagen.

Por ejemplo, si utilizamos un objetivo de 63x de inmersión en aceite con A.N. de 1.4, nos proporcionará imágenes excepcionales.

Cuanto menores sean las distancias de trabajo, más intensas serán las imágenes.

Para obtener una gran resolución en análisis de imagen, es necesario utilizar objetivos con distancias de trabajo cortas y elevadas aperturas numéricas.

El análisis de imagen (digital) es una técnica habitualmente empleada en microscopía invertida, y por ello las placas WillCo-dish^TM se utilizan para que las distancias de trabajo cortas resulten más efectivas.

II-Ad 7. : Micromanipulación :

Con WillCo-dish^TM , la distancia de trabajo efectiva del objetivo se puede utilizar en su capacidad máxima. Por ello en aplicaciones como la fertilidad y neurología, que requieren micromanipulación, puede trabajarse con objetivos de grandes aumentos y elevada A.N.

II-Ad 8. : Campos de aplicación :

Los campos de aplicación que se benefician de los diferentes tipos de placas WillCo-dish^TM  son:

1. Mayor resolución, utilizando un objetivo con una distancia de trabajo corta.
2. Ausencia de efectos birrefringentes gracias al fondo de vidrio fino (0.17 mm).
3. Distancias de trabajo superiores, para la micromanipulación.
4. Distancias de trabajo de objetivo más cortas, lo que genera imágenes más brillantes en fluorescencia.
5. Elevadas A.N., que permiten obtener grandes resoluciones.
6. Disponemos de placas WillCo-dish^TM estériles y "Embrio/Endorfina" testadas.
7. Calor directo y especialmente uniforme proveniente de la platina termostatizada del microscopio, dado que el vidrio está en contacto directo con dicha platina. (¡La única placa competencia de la nuestra, aunque no comercializada en España todavía, presenta una base en la que vidrio y plástico no están en el mismo plano!)
8. En FIV, ya no es necesario transferir de una placa de plástico a otra oocitos y embriones, salvo si se utilizan medios distintos. Todo ello permite:

Eliminar el riesgo de transferencia múltiple de oocitos y embriones.

Evitar posibles errores, al no producirse transferencia de oocitos y embriones.

Ahorrar tiempo para transferencias múltiples de oocitos y embriones.

Reducir el número de placas de plástico por paciente.

Ahorrar grandes cantidades de dinero por paciente en pipetas de transferencia de vidrio, que son del mismo orden de costo cada una que la placa Will-Co.

III-b. : Ventajas e inconvenientes (utilizando vidrio o plástico) :

Todas las células y tejidos muestran una preferencia bien por el vidrio o por el plástico (con o sin ausencia de algún tipo de tratamiento en su superficie). Las células pueden incluso tener preferencia por algún tipo de vidrio o plástico en particular.

Por este motivo, en nuestro departamento de I+D trabajamos en el diseño de placas con fondo de vidrio y aspecto plástico (revestidas), de unas pocas micras de grosor, hidrofóbicas o hidrofílicas y biocompatibles (no tóxicas).

Para estas placas revestidas que hemos desarrollado, estériles y no estériles, no existen límites de aplicación en cualquier campo de la microscopía invertida de altas prestaciones, en el ámbito de la investigación científica.

Calidad, Soporte y Servicio :

Los productos WillCo Wells B.V. se ajustan a las normas más exigentes en materia de selección de materia prima, planta de producción, producción, logística, embalaje y envío (exportación). La producción y el manipulado de WillCo-dish^TM se lleva a cabo de acuerdo con las normas ISO 9001, ISO 9002, EN 46001 y EN 46002.

Hemos solicitado el registro CE clase 2a para los productos WillCo-dish^TM y dispondremos del mismo antes de fines del año 1998.

WillCo Wells B.V. y por tanto Leica Microsistemas proporcionan un servicio completo en términos de entrega inmediata y substitución al momento (sin coste alguno) de cualquiera de nuestros productos, cuya fabricación no haya cumplido nuestras normas (p.ej. revestimiento inadecuado).

IV. Productos WillCo-dish^TM :

Los siguientes tipos de placas con fondo de vidrio fino estarán disponibles :